Plasmide CRISPR d'Activation (h) ATRX: sc-400454-ACT

ATRX (syndrome alpha-thalassémie/retard mental lié à l’X) code une enzyme de remodelage de la chromatine dépendante de l’ATP, de type SWI/SNF, qui s’associe à DAXX pour déposer la variante d’histone H3.3 au niveau de l’hétérochromatine répétée, des télomères et des régions péricentromériques. En régulant le positionnement des nucléosomes, les profils de méthylation de l’ADN et l’organisation de la chromatine à grande échelle, ATRX influence le contrôle transcriptionnel, la stabilité des fourches de réplication et les réponses aux dommages de l’ADN. La perte ou le dysfonctionnement d’ATRX est associé à une dérégulation épigénétique et à une instabilité génomique, et est fréquemment étudié dans le contexte des troubles du neurodéveloppement et des voies de maintenance des télomères impliquées dans le cancer.

ATRX Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATRX sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ATRX Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATRX dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATRX, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ATRX. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATRX natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ATRX au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ATRX dans les cellules tumorales présentant une expression de ATRX silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.