ATR CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400335-ACT

ATR（ataxia telangiectasia and Rad3-related）はセリン／スレオニンプロテインキナーゼであり、複製ストレス応答における中枢的なセンサー兼エフェクターとして機能します。主にRPAで被覆された一本鎖DNAによって活性化され、ATRはCHK1などの基質をリン酸化することでS期チェックポイントを制御し、停滞した複製フォークの安定化、複製開始点（オリジン）の発火制御、DNA修復の促進を担います。ATRシグナルは、相同組換え、ヌクレオチド除去修復（NER）、およびより広範なゲノム維持ネットワークと統合され、染色体不安定性を抑制します。ATR経路活性の破綻は、変異負荷の増大や、内因性／外因性の遺伝毒性ストレスに対する応答の変化と関連しており、がん生物学やDNA損傷シグナリングの研究において重要です。

ATR CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ATR CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ATRの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるATR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるATR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。