ATP8A1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406843

Descripción general

ATP8A1 codifica una flippasa de fosfolípidos P4-ATPasa que mantiene la asimetría lipídica de la membrana plasmática al translocar aminofosfolípidos como la fosfatidilserina y la fosfatidiletanolamina entre las monocapas de la membrana. Mediante esta actividad, ATP8A1 contribuye a la curvatura de la membrana, la gemación de vesículas y el tráfico endocítico, influyendo en la organización del citoesqueleto y en la dinámica polarizada de la membrana. La alteración de la asimetría lipídica puede modificar las plataformas de señalización y los procesos dependientes de la membrana, lo que vincula la función de ATP8A1 con vías que regulan el transporte intracelular y la supervivencia celular. La desregulación de ATP8A1 se ha investigado en el contexto de fenotipos neurológicos y metabólicos, en los que la composición de la membrana y el tráfico son determinantes clave de la homeostasis celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ATP8A1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ATP8A1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ATP8A1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ATP8A1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ATP8A1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ATP8A1 para la investigación de la señalización de ATP8A1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ATP8A1 críticos para la función de ATP8A1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ATP8A1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ATP8A1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ATP8A1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ATP8A1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ATP8A1 (h) y el plásmido HDR ATP8A1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ATP8A1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ATP8A1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.