ATP6F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406611

Übersicht

ATP6V0B kodiert ATP6F, eine akzessorische Untereinheit der vakuolären H+-ATPase (V-ATPase), die den ATP-getriebenen Protonentransport zur Ansäuerung von Endosomen, Lysosomen und sekretorischen Vesikeln unterstützt. Die V-ATPase-Aktivität ist zentral für den endozytotischen Transport, das Rezeptorrecycling, die Autophagie-Lysosomen-Funktion und die pH-abhängige Verarbeitung von Makromolekülen und beeinflusst damit die Nährstoffsensorik und zelluläre Stressantworten. Störungen von V-ATPase-Untereinheiten können die Organellenhomöostase beeinträchtigen und wurden mit veränderter Vesikeldynamik sowie krankheitsrelevanten Phänotypen in Kontexten wie Neurodegeneration, Infektionsbiologie und Krebszellmetabolismus in Verbindung gebracht, in denen die Kompartimentansäuerung häufig umgestaltet ist.

Das ATP6F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ATP6V0B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ATP6V0B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ATP6V0B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ATP6F-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ATP6V0B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ATP6F-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ATP6V0B-Exone abzielen, die für die ATP6F-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ATP6V0B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ATP6F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ATP6F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ATP6V0B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ATP6F HDR-Plasmid (h) und ATP6F HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ATP6V0B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ATP6V0B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.