Plasmide Double Nickase (h) ATP6E: sc-404046-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ATP6E correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ATP6E Double Nickase (h) et le plasmide ATP6E Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATP6V1E1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ATP6E Antibody (G-3): sc-514143
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ATP6E | sc-404046-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ATP6E | sc-404046-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V1E1 code la sous-unité E1 (ATP6E) du domaine périphérique V1 de l’ATPase vacuolaire à protons (V-ATPase), une ATPase rotative multisous-unité qui fournit l’énergie nécessaire à la translocation des protons afin d’acidifier les endosomes, les lysosomes et d’autres compartiments intracellulaires. En contrôlant le pH des organites, l’activité de la V-ATPase régule l’endocytose médiée par les récepteurs, la dégradation lysosomale, l’autophagie, la présentation des antigènes et le trafic vésiculaire, avec des effets en aval sur la détection des nutriments et les voies de signalisation couplées au transport membranaire. Une perturbation de la composition en sous-unités ou du fonctionnement de la V-ATPase peut déstabiliser l’homéostasie cellulaire et a été associée à des troubles héréditaires de l’acidification et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ainsi qu’à des altérations de la protéostasie et des réponses au stress métabolique. ATP6V1E1 constitue donc un locus utile pour étudier, dans les cellules humaines, la régulation dépendante du pH de la dynamique membranaire et de la fonction des organites.
ATP6E Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATP6V1E1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATP6V1E1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATP6V1E1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATP6V1E1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.