Plásmido Doble Nickase (h) ATP6AP1: sc-404162-NIC

ATP6AP1 codifica un componente accesorio de la maquinaria de la H+-ATPasa vacuolar (V-ATPasa) que favorece la acidificación de los orgánulos a lo largo del sistema endolisosomal. Al modular el pH luminal en compartimentos como los lisosomas y el aparato de Golgi, ATP6AP1 influye en el tráfico de proteínas, el reciclaje de receptores y la degradación de macromoléculas dependiente de lisosomas, dando forma así a la proteostasis y la señalización celulares. El funcionamiento adecuado de la V-ATPasa se interconecta con las vías de autofagia-lisosoma y con procesos secretores dependientes de la glicosilación, que son críticos para mantener la homeostasis en condiciones metabólicas y de estrés. La desregulación de la acidificación y el tráfico asociados a ATP6AP1 se ha vinculado a trastornos que afectan el metabolismo celular, el transporte de membrana y la fisiología de distintos órganos y sistemas, lo que la convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de la función de las membranas internas.

ATP6AP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP6AP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP6AP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP6AP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP6AP1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.