Plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP5S (h): sc-406318

Présentation

ATP5S code une petite sous-unité accessoire du complexe mitochondrial F1F0 ATP synthase (complexe V), qui catalyse la production d’ATP en utilisant la force proton-motrice générée par la phosphorylation oxydative. Le bon fonctionnement d’ATP5S soutient la bioénergétique mitochondriale, le maintien du potentiel de membrane et la coordination du métabolisme énergétique cellulaire avec des processus tels que l’apoptose et l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène. Des perturbations de l’assemblage de l’ATP synthase ou de l’activité du complexe V sont associées à une dysfonction mitochondriale, un trait caractéristique observé dans un large éventail d’affections, notamment des phénotypes neuromusculaires et neurodégénératifs ainsi que le remodelage métabolique tumoral. Par conséquent, ATP5S est pertinent pour des études portant sur la respiration mitochondriale, les réponses au stress énergétique et les voies de signalisation mitochondriales qui influencent les décisions de destinée cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP5S (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ATP5S dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ATP5S, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ATP5S à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ATP5S.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ATP5S pour l'étude de la signalisation de ATP5S, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ATP5S essentiels à la fonction de ATP5S
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ATP5S pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ATP5S plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ATP5S plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ATP5S. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ATP5S plasmide HDR (h) et le ATP5S (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ATP5S pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ATP5S définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.