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ATP5HCRISPR激活质粒(h) | sc-403948-ACT | 20 µg | $397.00 |
ATP5H 编码线粒体 ATP 合酶(复合体 V)的一个小型结构亚基,该亚基支持 F0 区段的组装与稳定性,而 F0 区段是实现质子偶联 ATP 生成所必需的。通过参与氧化磷酸化,ATP5H 影响细胞能量稳态、线粒体膜电位和氧化还原平衡,并对代谢依赖的信号传导与应激反应产生下游影响。ATP 合酶亚基的表达或功能异常常与线粒体功能障碍表型相关,包括生物能量学受损以及对氧化应激敏感性升高;这些都是多种神经肌肉与代谢性疾病中反复出现的共同特征。作为线粒体生物能量学的关键节点,ATP5H 适用于研究呼吸链调控、线粒体质量控制,以及疾病相关细胞状态中的代谢重编程。
ATP5H CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ATP5H的表达。
ATP5H CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的ATP5H基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于ATP5H转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ATP5H表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的ATP5H位点,并能够研究内源性位点上依赖于ATP5H的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ATP5H表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ATP5H通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。