Plasmide Double Nickase (h) ATP5B: sc-401009-NIC

ATP5B code la sous-unité β de l’ATP synthase mitochondriale (complexe V), un composant catalytique central qui couple le flux de protons à travers la membrane interne mitochondriale à la production d’ATP via la phosphorylation oxydative. En régulant l’état énergétique cellulaire, ATP5B influence le potentiel de membrane mitochondriale, l’équilibre rédox et des processus dépendants de l’ATP tels que l’homéostasie ionique, la synthèse protéique et les réponses au stress. Une activité dérégulée de l’ATP synthase et, plus largement, un dysfonctionnement mitochondrial sont associés à des altérations de la bioénergétique et de la gestion des espèces réactives de l’oxygène observées dans diverses maladies humaines, notamment avec des phénotypes neuromusculaires et neurodégénératifs. En tant que produit génique mitochondrial hautement conservé, ATP5B est fréquemment utilisé pour étudier le métabolisme mitochondrial et ses interactions avec l’apoptose et les voies intégrées de signalisation du stress.

ATP5B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATP5B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATP5B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATP5B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATP5B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.