Plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP11C (m): sc-435843

Présentation

Atp11c code pour l’ATP11C, une flippase de phospholipides de type P4‑ATPase qui maintient l’asymétrie lipidique de la membrane plasmique en transloquant des aminophospholipides, tels que la phosphatidylsérine, du feuillet externe vers le feuillet interne. Cette activité soutient le trafic vésiculaire, l’endocytose et les processus de remodelage membranaire qui influencent la signalisation des récepteurs et les programmes de survie cellulaire. Chez la souris, la fonction d’ATP11C a été associée à l’homéostasie des systèmes hématopoïétique et immunitaire ; sa perturbation affecte le développement des cellules B et la biologie érythroïde, ce qui la rend pertinente pour l’étude de phénotypes de type immunodéficience et de mécanismes liés à l’anémie. La distribution lipidique membranaire altérée contrôlée par ATP11C peut également moduler l’élimination des cellules apoptotiques et la signalisation inflammatoire via l’exposition de la phosphatidylsérine à la surface cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP11C (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Atp11c dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Atp11c, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Atp11c à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ATP11C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Atp11c pour l'étude de la signalisation de ATP11C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Atp11c essentiels à la fonction de ATP11C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Atp11c pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ATP11C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ATP11C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Atp11c. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ATP11C plasmide HDR (m) et le ATP11C (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Atp11c pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Atp11c définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.