ATP11B Double Nickase Plasmid (m): sc-429296-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ATP11B Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ATP11B Double-Nickase-Plasmid (m) und ATP11B Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Atp11b abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ATP11B Double Nickase Plasmid (m) | sc-429296-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATP11B Double Nickase Plasmid (m2) | sc-429296-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Atp11b kodiert ATP11B, eine P4-ATPase-Phospholipid-Flippase, die zur Aufrechterhaltung der Membranlipid-Asymmetrie beiträgt, indem sie Aminophospholipide innerhalb des Endomembransystems durch Lipiddoppelschichten transloziert. Durch die Beeinflussung von Vesikelknospung, Membrankrümmung sowie Transportprozessen über das trans-Golgi-Netzwerk und endosomale Kompartimente unterstützt ATP11B die Sortierung von Fracht, das Recycling von Rezeptoren und die Homöostase von Organellen. Störungen des Lipidtransports und der von P4-ATPasen gesteuerten vesikulären Wege können die Zellpolarität, Stressantworten und Signaloutputs verändern, die mit Entzündung und membranbezogenen Fehlfunktionen im Zusammenhang mit Neurodegeneration verknüpft sind. In Mausmodellen bietet eine Perturbation von Atp11b einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie Phospholipid-Remodelling mit intrazellulärem Transport und Proteostase zusammenwirkt.
ATP11B Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Atp11b-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Atp11b abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Atp11b-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Atp11b-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.