Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO ATGL (m): sc-426224
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- ATGL Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique ATGL, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ATGL Antibody (F-7): sc-365278
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO ATGL (m) | sc-426224 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin *Pnpla2* code la lipase des triglycérides du tissu adipeux (ATGL), une enzyme clé limitant la vitesse qui initie l’hydrolyse cytosolique des triglycérides pour générer du diacylglycérol et des acides gras libres destinés à la β‑oxydation mitochondriale et à la signalisation lipidique. L’activité d’ATGL coordonne la lipolyse avec l’homéostasie énergétique et s’inscrit à l’interface du renouvellement des gouttelettes lipidiques, des programmes transcriptionnels médiés par les PPAR et des voies métaboliques sensibles à l’insuline. Une perturbation de la lipolyse dépendante d’ATGL modifie le stockage lipidique cellulaire et le flux d’acides gras, reliant *Pnpla2* à une dérégulation du métabolisme lipidique et à des réponses au stress dans des tissus à forte activité métabolique. Ces caractéristiques font d’ATGL une cible largement utilisée pour des études mécanistiques de la biologie des gouttelettes lipidiques, de la détection des nutriments et du remodelage métabolique.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ATGL (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pnpla2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pnpla2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pnpla2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ATGL.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pnpla2 pour l'étude de la signalisation de ATGL, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Pnpla2 essentiels à la fonction de ATGL
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pnpla2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le ATGL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ATGL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pnpla2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le ATGL plasmide HDR (m) et le ATGL (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pnpla2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pnpla2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.