ATF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-400155-KO-2
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- ATF4 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im ATF4-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ATF4: sc-390063
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ATF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) | sc-400155-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Der aktivierende Transkriptionsfaktor 4 (ATF4) ist ein bZIP-Transkriptionsfaktor und ein zentrales Element der integrierten Stressantwort (ISR). Er wird nach Phosphorylierung von eIF2α bevorzugt translatiert und koordiniert adaptive Transkriptionsprogramme. ATF4 reguliert den Aminosäurestoffwechsel, die Redoxhomöostase, Autophagie und die ER-Stress-Signalgebung, einschließlich Crosstalk mit PERK–EIF2AK3, ATF3 und CHOP/DDIT3, um ein Gleichgewicht zwischen Überleben und apoptotischen Konsequenzen herzustellen. Über die Kontrolle von Nährstoffsensorik und Proteostase beeinflusst ATF4 die mitochondriale Funktion und Programme der zellulären Differenzierung und trägt zur transkriptionellen Umprogrammierung unter Hypoxie und oxidativem Stress bei. Eine fehlregulierte ATF4-Aktivität wird mit der Stressadaptation von Krebszellen, proteotoxischem Stress im Zusammenhang mit Neurodegeneration sowie Phänotypen metabolischer Erkrankungen in Verbindung gebracht und macht ATF4 zu einem wichtigen Knotenpunkt für mechanistische Untersuchungen stressresponsiver Gen-Netzwerke.
Das ATF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ATF4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ATF4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ATF4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ATF4-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ATF4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ATF4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf ATF4-Exone abzielen, die für die ATF4-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere ATF4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom ATF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ATF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ATF4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ATF4 HDR-Plasmid (h) und ATF4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ATF4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ATF4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.