Plasmide CRISPR d'Activation (h) ATF3: sc-416577-ACT

ATF3 (activating transcription factor 3) est un facteur de transcription bZIP inductible par le stress, qui intègre divers signaux tels que le stress du réticulum endoplasmique (RE), les dommages à l’ADN, le stress oxydatif et la signalisation inflammatoire en programmes transcriptionnels dépendants du contexte. Il module des réseaux géniques apparentés à AP-1 et peut agir comme répresseur ou activateur transcriptionnel selon ses partenaires de liaison et l’état de la chromatine, influençant des issues telles que le contrôle du cycle cellulaire, l’apoptose et l’adaptation métabolique. L’activité d’ATF3 recoupe les voies MAPK, NF-κB et la réponse aux protéines mal repliées (UPR), reliant les réponses au stress aigu à des changements plus durables de la différenciation et de la régulation immunitaire. Une expression dérégulée d’ATF3 a été associée à des phénotypes inflammatoires altérés et à une signalisation de stress liée aux tumeurs, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la plasticité des états cellulaires.

ATF3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATF3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ATF3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATF3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATF3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ATF3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATF3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ATF3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ATF3 dans les cellules tumorales présentant une expression de ATF3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.