Plasmide CRISPR d'Activation (h) ATF-6α: sc-400259-ACT

ATF6 code le facteur de transcription activateur 6α (ATF-6α), un facteur de transcription bZIP ancré à la membrane du réticulum endoplasmique (RE) qui sert de capteur et d’effecteur principal de la réponse aux protéines mal repliées (UPR). En cas de stress du RE, ATF-6α est transporté vers l’appareil de Golgi où il subit une protéolyse intramembranaire régulée, libérant un fragment nucléaire qui induit l’expression de gènes impliqués dans le chaperonnage du RE, la dégradation associée au RE (ERAD) et la protéostasie. Par des interactions croisées avec les voies PERK–eIF2α–ATF4 et IRE1–XBP1, ATF-6α coordonne le remodelage adaptatif de la capacité de la voie sécrétoire et la résilience cellulaire au stress. Une dérégulation de la signalisation ATF6/UPR est impliquée dans des contextes tels que la dysfonction métabolique, l’inflammation, la neurodégénérescence et l’adaptation des cellules tumorales au stress, ce qui fait d’ATF6 un nœud utile pour les études mécanistiques de la protéostasie et de la signalisation du stress.

ATF-6α Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATF6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ATF-6α Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATF6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATF6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ATF-6α. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATF6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ATF-6α au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ATF-6α dans les cellules tumorales présentant une expression de ATF6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.