Plasmide Double Nickase (h) ATF-5: sc-416821-NIC

ATF5 code le facteur de transcription activateur 5 (ATF-5), un facteur de transcription de type « basic leucine zipper » (bZIP) qui coordonne des programmes d’expression génique liés à l’adaptation au stress cellulaire, à la survie et au maintien de l’identité de lignée. L’activité d’ATF-5 est fréquemment intégrée aux voies de signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) et de la réponse intégrée au stress (ISR), notamment via la régulation transcriptionnelle dépendante de l’axe PERK–eIF2α–ATF4, et peut influencer l’homéostasie mitochondriale ainsi que des réseaux transcriptionnels associés à l’apoptose. Dans de nombreux systèmes cellulaires, ATF-5 favorise la prolifération et la résistance au stress métabolique ou protéotoxique, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la signalisation oncogénique, des états de différenciation et du remodelage transcriptionnel induit par le stress. Une expression dérégulée d’ATF5 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et modèles neurobiologiques, ce qui motive l’exploration de ses cibles en aval et des dépendances de voies dans des phénotypes associés aux maladies.

ATF-5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATF5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATF5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATF5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATF5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.