ATF-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430721
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- ATF-5 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im ATF-5-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ATF-5: sc-377168
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ATF-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-430721 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Der aktivierende Transkriptionsfaktor 5 (ATF-5), kodiert durch das Mausgen *Atf5*, ist ein Transkriptionsfaktor der basic-Leucin-Zipper-(bZIP)-Familie, der Genexpressionsprogramme reguliert, welche die Anpassung an zellulären Stress, Differenzierung und das Überleben von Zellen steuern. ATF-5 ist an Signalwegen der integrierten Stressantwort beteiligt und kann vorgeschaltete, mit eIF2α/ATF4 assoziierte Signale in transkriptionelle Outputs überführen, die die mitochondriale Funktion und die Proteostase beeinflussen. Im Nervensystem und in anderen sich entwickelnden Geweben wird ATF-5 mit Lineage-Entscheidungen sowie der Aufrechterhaltung proliferativer bzw. vorläuferzellähnlicher Zustände in Verbindung gebracht, vermittelt durch eine kontextabhängige transkriptionelle Kontrolle. Eine dysregulierte ATF-5-Aktivität wurde mit abweichender Stresstoleranz und veränderten Zellüberlebenswegen assoziiert, was seine Relevanz für mechanistische Studien zur krankheitsbezogenen Umgestaltung transkriptioneller Netzwerke unterstreicht.
Das ATF-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Atf5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Atf5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Atf5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ATF-5-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Atf5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ATF-5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Atf5-Exone abzielen, die für die ATF-5-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Atf5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom ATF-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ATF-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Atf5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ATF-5 HDR-Plasmid (m) und ATF-5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Atf5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Atf5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.