Plasmide CRISPR d'Activation (h) ATF-2: sc-416662-ACT

Le gène humain **ATF2** code le facteur de transcription activateur 2 (ATF‑2), un facteur de transcription de type bZIP activé par des kinases sensibles au stress, notamment JNK et p38 MAPK. Après phosphorylation, ATF‑2 régule des programmes géniques inductibles contrôlant la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN, l’inflammation et l’apoptose, souvent via l’hétérodimérisation avec des membres de la famille AP‑1 et l’intégration des signaux MAPK. L’activité d’ATF‑2 s’entrecroise avec la régulation de la chromatine et la transcription des gènes de réponse immédiate, influençant des programmes dépendants du contexte dans la signalisation immunitaire et l’adaptation cellulaire au stress génotoxique et oxydatif. Une signalisation ATF‑2 dérégulée a été associée à des phénotypes altérés de prolifération et de réponse au stress rapportés dans divers modèles de cancers et de maladies inflammatoires, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique dans les études de voies de signalisation.

ATF-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ATF-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ATF-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ATF-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ATF-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ATF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.