Plasmide CRISPR d'Activation (h) ATF-1/ATF1: sc-400488-ACT

ATF1 code le facteur de transcription activateur 1 (ATF‑1), un facteur de transcription bZIP de la famille CREB/ATF qui se lie aux éléments de réponse à l’AMPc (cAMP response elements) afin de moduler l’expression génique dépendante des stimuli. ATF‑1 intègre des signaux en aval des voies AMPc/PKA et MAPK et est régulé par phosphorylation pour coordonner des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération, la différenciation, l’adaptation au stress et la survie. Par hétéro‑ et homodimérisation avec des facteurs apparentés tels que CREB et des membres de la famille JUN, ATF‑1 contribue à la dynamique des réseaux transcriptionnels qui façonnent les transitions d’état cellulaire. Une activité d’ATF1 dérégulée ainsi que des réarrangements chromosomiques impliquant ATF1 ont été associés à des signatures transcriptionnelles oncogéniques dans certains contextes tumoraux, ce qui étaye son utilité pour des études mécanistiques des voies de signalisation aberrantes et du contrôle transcriptionnel.

ATF-1/ATF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ATF-1/ATF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ATF-1/ATF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ATF-1/ATF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ATF-1/ATF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ATF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.