Partículas Lentivirales de Activación (h) Ataxin-1: sc-403309-LAC

ATXN1 codifica la ataxina-1, una proteína predominantemente nuclear que participa en la regulación transcripcional y el metabolismo del ARN mediante interacciones con factores asociados a la cromatina y complejos de unión a ARN. La ataxina-1 contribuye a la homeostasis neuronal al influir en programas de expresión génica vinculados a la función sináptica, el control de calidad de las proteínas y las vías de respuesta al estrés. Las alteraciones en la dosis de ATXN1 o la expansión de poliglutaminas afectan las interacciones proteína–proteína y la formación de complejos nucleares, perturbando las redes transcripcionales posteriores. Estos cambios moleculares se asocian estrechamente con fenotipos neurodegenerativos, lo que convierte a ATXN1 en una diana clave para estudiar mecanismos de regulación génica en sistemas modelo humanos neuronales y gliales.

Las partículas de activación lentiviral Ataxin-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ATXN1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Ataxin-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ATXN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Ataxin-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ATXN1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.