Plasmide Double Nickase (h) ATAD1: sc-413720-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ATAD1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ATAD1 Double Nickase (h) et le plasmide ATAD1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATAD1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ATAD1 | sc-413720-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ATAD1 | sc-413720-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATAD1 (protéine 1 contenant un domaine AAA de la famille des ATPases) est une ATPase AAA+ ancrée à la membrane, localisée principalement à la membrane externe de la mitochondrie, où elle soutient le contrôle qualité des protéines en extrayant des protéines à ancrage C‑terminal (tail-anchored) mal localisées ou bloquées et en coordonnant leur élimination. Grâce à un remodelage dépendant de l’ATP et à un dialogue avec les voies ubiquitine–protéasome, ATAD1 contribue au maintien de la protéostasie mitochondriale, de l’intégrité de l’organite et de l’homéostasie cellulaire en situation de stress protéotoxique ou métabolique. La perturbation de cette surveillance dépendante d’ATAD1 peut altérer la dynamique mitochondriale et la fonction bioénergétique, reliant ce facteur à des réseaux plus larges de réponse au stress qui influencent la survie et la différenciation cellulaires. Des altérations de l’activité d’ATAD1 ainsi que des variations du nombre de copies ont été étudiées dans le cadre de la biologie des tumeurs et de phénotypes neurodégénératifs, où la dysfonction mitochondriale constitue une caractéristique centrale.
ATAD1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATAD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATAD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATAD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATAD1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.