Plásmido Doble Nickase (h) ASPP1: sc-404330-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ASPP1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ASPP1 (h) y el plásmido de doble nickasa ASPP1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PPP1R13B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ASPP1 Anticuerpo (LX011): sc-53903
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ASPP1 | sc-404330-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ASPP1 | sc-404330-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPP1R13B codifica la proteína 1 estimuladora de la apoptosis de p53 (ASPP1), un regulador de la transcripción sensible al estrés que modula la actividad de la familia p53 e influye en las decisiones sobre el destino celular. ASPP1 favorece programas transcripcionales vinculados con la apoptosis y el control del ciclo celular al facilitar la unión de p53/p63/p73 a promotores diana específicos, conectándose con las vías de respuesta al daño del ADN y de señalización de puntos de control. A través de estas funciones, PPP1R13B se ha estudiado en el contexto de alteraciones en la competencia apoptótica, la atenuación de vías supresoras de tumores y una desregulación más amplia de redes transcripcionales relevantes para la transformación oncogénica. Su papel regulador también lo hace útil para dilucidar cómo las salidas de p53 dependientes del contexto se moldean por la disponibilidad de cofactores y el estado de la cromatina.
ASPP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PPP1R13B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PPP1R13B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PPP1R13B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PPP1R13B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.