Plasmide CRISPR/Cas9 KO ASPP1 (m): sc-423473
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- ASPP1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique ASPP1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ASPP1 Antibody (LX011): sc-53903
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO ASPP1 (m) | sc-423473 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Ppp1r13b code ASPP1, une protéine pro-apoptotique qui se lie au domaine de liaison à l’ADN des facteurs de transcription de la famille p53 et oriente leur activité vers des gènes cibles pro-apoptotiques. En modulant la transcription dépendante de p53/p63/p73, ASPP1 contribue à l’apoptose induite par le stress, au contrôle du cycle cellulaire et au maintien de l’intégrité génomique. La fonction d’ASPP1 s’inscrit à l’interface des voies de signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN et des réseaux de co-régulateurs transcriptionnels qui façonnent les décisions de destinée cellulaire. Une dérégulation de cet axe est pertinente en biologie tumorale et dans d’autres contextes où des défauts d’apoptose et de contrôle des points de contrôle contribuent à des phénotypes cellulaires associés aux maladies.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ASPP1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ppp1r13b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ppp1r13b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ppp1r13b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ASPP1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ppp1r13b pour l'étude de la signalisation de ASPP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Ppp1r13b essentiels à la fonction de ASPP1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ppp1r13b pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le ASPP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ASPP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ppp1r13b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le ASPP1 plasmide HDR (m) et le ASPP1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ppp1r13b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ppp1r13b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.