Particules Lentivirales d'Activation (h) Asparagine synthetase: sc-402240-LAC

ASNS code l’asparagine synthétase humaine, une enzyme cytosolique qui catalyse la conversion, dépendante de l’ATP, de l’aspartate et de la glutamine en asparagine et glutamate, reliant le métabolisme de l’azote à l’homéostasie des acides aminés. En régulant la disponibilité intracellulaire de l’asparagine, ASNS influence la synthèse protéique, l’équilibre rédox et les réponses adaptatives à la limitation en nutriments, avec des liens avec la réponse intégrée au stress et les voies de détection des acides aminés. L’expression d’ASNS est fréquemment modulée en situation de stress métabolique et peut façonner la dépendance cellulaire aux acides aminés extracellulaires, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la reprogrammation métabolique et de la tolérance au stress. Des altérations de l’activité et de la régulation d’ASNS ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux ainsi qu’à la biologie tumorale dans des contextes où la disponibilité en nutriments limite la croissance.

Les particules d'activation lentivirales Asparagine synthetase (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ASNS dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Asparagine synthetase (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ASNS, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Asparagine synthetase. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ASNS ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.