Plasmide Double Nickase (h) Asparagine synthetase: sc-402240-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Asparagine synthetase correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Asparagine synthetase Double Nickase (h) et le plasmide Asparagine synthetase Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ASNS. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Asparagine synthetase Antibody (G-10): sc-365809
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Asparagine synthetase | sc-402240-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Asparagine synthetase | sc-402240-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ASNS code l’asparagine synthétase humaine, une amidotransférase cytosolique qui catalyse la conversion, dépendante de l’ATP, de l’aspartate et de la glutamine en asparagine et glutamate. Cette activité relie l’homéostasie des acides aminés au métabolisme de l’azote et soutient les besoins biosynthétiques en situation de stress nutritionnel via son intégration à la réponse aux acides aminés et au contrôle de la traduction régulé par mTOR. L’expression d’ASNS est régulée de manière dynamique par des voies de stress cellulaire telles que la signalisation ATF4, influençant l’adaptation à une limitation en glutamine et au stress du réticulum endoplasmique. Une dérégulation de l’activité et de l’expression d’ASNS a été associée à des états métaboliques altérés observés dans la dépendance des cellules cancéreuses aux nutriments, ainsi qu’à des troubles du neurodéveloppement impliquant une biosynthèse d’asparagine déficiente.
Asparagine synthetase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ASNS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ASNS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ASNS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ASNS.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.