Plasmide CRISPR d'Activation (h) ASIC1: sc-401452-ACT

L’ASIC1 humain (acid-sensing ion channel subunit 1) code un canal ionique de la famille ENaC/DEG, activé par les protons et perméable au sodium, qui répond à l’acidification extracellulaire. ASIC1 contribue à l’excitabilité neuronale et à la signalisation calcique via la dépolarisation membranaire, modulant la transmission synaptique, la transduction sensorielle et la plasticité dépendante de l’activité. En couplant les fluctuations de pH aux flux ioniques, ASIC1 s’insère dans des voies associées à des microenvironnements ischémiques et inflammatoires, notamment les réponses au stress excitotoxique et la signalisation neuro-immune. Un dérèglement de l’activité et de l’expression d’ASIC1 a été étudié dans des modèles de neurodégénérescence, de douleur, de comportements liés à l’anxiété et d’acidose associée aux tumeurs, ce qui souligne sa pertinence pour des études mécanistiques de la signalisation dépendante du pH.

ASIC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ASIC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ASIC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ASIC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ASIC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ASIC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ASIC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ASIC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ASIC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ASIC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.