Plasmide CRISPR/Cas9 KO ASH2L (m): sc-423846

Présentation

Ash2l code ASH2L, un composant central des complexes de méthyltransférase SET1/MLL ciblant la lysine 4 de l’histone H3 (H3K4), qui régulent l’état de la chromatine et les programmes transcriptionnels. En contrôlant la méthylation de H3K4, ASH2L contribue à l’expression génique dépendante de l’ARN polymérase II, à l’activité des enhancers et au maintien épigénétique de l’identité cellulaire au cours du développement et de la différenciation. La régulation de la chromatine dépendante d’ASH2L s’articule avec des voies impliquées dans la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la spécification des lignages, ce qui la rend pertinente pour les études de biologie des cellules souches et d’hématopoïèse. Une dérégulation d’ASH2L ou de l’activité des complexes MLL/SET1 a été associée à des états transcriptionnels oncogéniques et à des anomalies du développement, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans des modèles de maladie axés sur l’épigénétique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ASH2L (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ash2l dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ash2l, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ash2l à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ASH2L.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ash2l pour l'étude de la signalisation de ASH2L, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ash2l essentiels à la fonction de ASH2L
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ash2l pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ASH2L plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ASH2L plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ash2l. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ASH2L plasmide HDR (m) et le ASH2L (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ash2l pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ash2l définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.