Plasmide CRISPR d'Activation (h) ASH1L: sc-402901-ACT

ASH1L (absent, small, or homeotic discs 1-like) code une méthyltransférase nucléaire des lysines d’histones, qui dépose la méthylation H3K36 afin de soutenir l’élongation transcriptionnelle et de maintenir des programmes d’expression génique spécifiques des types cellulaires. Grâce à ses domaines de lecture de la chromatine et à son domaine catalytique, ASH1L contribue à équilibrer la répression médiée par Polycomb et l’activation au niveau de loci développementaux, influençant des processus tels que la différenciation neuronale et l’engagement de lignée. Le contrôle épigénétique régulé par ASH1L s’entrecroise avec des voies gouvernant le remodelage de la chromatine, l’activité des enhancers et la fidélité de la transcription. Des variations génétiques ou une dérégulation d’ASH1L ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des réseaux de régulation génique altérés, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la transcription pilotée par la chromatine.

ASH1L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ASH1L sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ASH1L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ASH1L dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ASH1L, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ASH1L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ASH1L natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ASH1L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ASH1L dans les cellules tumorales présentant une expression de ASH1L silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.