Plasmide CRISPR/Cas9 KO ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 (h): sc-400429

Présentation

ASGR1 code le récepteur 1 des asialoglycoprotéines (ASGPR1), une lectine dépendante du Ca²⁺, enrichie dans les hépatocytes, qui forme à la membrane plasmique le complexe récepteur des asialoglycoprotéines et médie l’endocytose clathrine‑dépendante des glycoprotéines désialylées. En se liant à des résidus terminaux de galactose ou de N‑acétylgalactosamine, ASGPR1 contribue à la clairance hépatique des glycoprotéines circulantes et influence le recyclage du récepteur ainsi que les voies de trafic lysosomal. Ce système récepteur‑ligand est largement utilisé comme modèle pour étudier les mécanismes de capture spécifiques du foie et le contrôle qualité des glycoprotéines. Les altérations de l’expression ou de la fonction d’ASGPR1 ont été examinées dans des contextes d’états hépatiques métaboliques et inflammatoires et sont pertinentes pour les recherches sur la régulation des récepteurs de surface des hépatocytes et leur capacité endocytaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ASGR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ASGR1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ASGR1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ASGR1 pour l'étude de la signalisation de ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ASGR1 essentiels à la fonction de ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ASGR1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ASGR1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 plasmide HDR (h) et le ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ASGR1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ASGR1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.