Plasmide CRISPR d'Activation (h) ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1: sc-400429-ACT

ASGR1 code pour le récepteur 1 des asialoglycoprotéines (ASGPR1), une lectine de type C enrichie dans les hépatocytes qui forme, à la membrane plasmique sinusoïdale, un complexe récepteur fonctionnel reconnaissant les galactoses terminaux ou la N‑acétylgalactosamine présents sur des glycoprotéines désialylées. Ce récepteur médie une endocytose dépendante de la clathrine et l’acheminement vers les lysosomes, contribuant au maintien de l’homéostasie des glycoprotéines sériques ainsi qu’à la clairance hépatique des glycoprotéines circulantes et des particules modifiées par des glycannes. L’activité d’ASGPR1 relie la reconnaissance des glycannes au recyclage du récepteur et aux voies de tri intracellulaire, en s’intégrant à la machinerie endocytaire et aux processus métaboliques hépatiques. Des altérations de l’expression ou de la fonction d’ASGR1 ont été associées à des changements dans la prise en charge des lipoprotéines et à des phénotypes cardiométaboliques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’absorption hépatospécifique, du renouvellement des protéines plasmatiques et des interactions glyco‑immunes.

ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ASGR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ASGR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ASGR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ASGR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ASGR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.