Plasmide Double Nickase (h) Arrestin-C: sc-403284-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Arrestin-C correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Arrestin-C Double Nickase (h) et le plasmide Arrestin-C Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ARR3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Arrestin-C Antibody (2D7): sc-293296
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Arrestin-C | sc-403284-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Arrestin-C | sc-403284-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARR3 code l’arrestine‑C (arrestine des cônes), un adaptateur de la famille des arrestines enrichi dans la rétine, qui se lie aux opsines des cônes activées et phosphorylées afin d’interrompre la signalisation des protéines G et de favoriser la désensibilisation des récepteurs. En coordonnant l’arrêt des GPCR et en contribuant au trafic et à la compartimentation des récepteurs, l’arrestine‑C aide à ajuster la cinétique de la phototransduction et l’adaptation à la lumière dans les photorécepteurs à cônes. Une altération de la fonction d’ARR3 est associée à des dysfonctionnements rétiniens et à des phénotypes visuels héréditaires, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie des cônes, de la régulation de la signalisation des opsines et des réponses au stress liées à la dégénérescence. Sa spécificité de type cellulaire facilite également la cartographie des voies des réseaux de signalisation médiés par les arrestines dans des modèles rétiniens humains.
Arrestin-C Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARR3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARR3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARR3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARR3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.