Plasmide CRISPR d'Activation (h) ARRDC4: sc-406413-ACT

ARRDC4 (arrestin domain containing 4) est une protéine adaptatrice humaine de la famille des α‑arrestines, impliquée dans la régulation du trafic des protéines membranaires et l’atténuation de la signalisation en couplant des récepteurs et des transporteurs aux voies d’endocytose et aux voies dépendantes de l’ubiquitine. Elle a été associée aux réponses cellulaires liées à l’énergie et au stress nutritionnel, notamment via la modulation du métabolisme du glucose et des lipides par des interactions avec des réseaux de signalisation métabolique. L’expression d’ARRDC4 répond à des signaux métaboliques et pourrait influencer le renouvellement des récepteurs ainsi que des programmes transcriptionnels en aval qui façonnent l’adaptation cellulaire au stress. Une activité ou une expression dérégulée d’ARRDC4 a été étudiée dans des contextes associés à des dysfonctionnements métaboliques et à une homéostasie de la signalisation altérée, en lien avec la biologie de maladies complexes.

ARRDC4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ARRDC4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ARRDC4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ARRDC4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ARRDC4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ARRDC4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ARRDC4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ARRDC4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ARRDC4 dans les cellules tumorales présentant une expression de ARRDC4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.