Arnt 1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401039-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Arnt 1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Arnt 1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Arnt 1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ARNT abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Arnt 1: sc-17811
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Arnt 1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401039-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Arnt 1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401039-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARNT (Aryl-Hydrocarbon-Rezeptor-Nuclear-Translocator; HIF-1β) kodiert einen basischen Helix-Loop-Helix-PAS-Transkriptionsfaktor, der als obligater Dimerisierungspartner für AHR und hypoxieinduzierbare Faktoren, einschließlich HIF-1α und HIF-2α, fungiert. Über diese Komplexe verknüpft Arnt 1 die Erkennung von Xenobiotika mit Sauerstoff- und metabolischer Signalgebung, um Transkriptionsprogramme zu steuern, die Entgiftungsenzyme, Angiogenese, glykolytischen Stoffwechsel, mitochondriale Anpassung und Zellschicksalsentscheidungen kontrollieren. Die ARNT-abhängige Genregulation trägt zu zellulären Antworten auf Hypoxie und Umweltliganden bei und ist relevant für Entzündung, Barrierebiologie und die Anpassung an das Tumormikromilieu. Eine fehlregulierte Aktivität der AHR/HIF-Signalwege bringt ARNT in Zusammenhänge wie Karzinogenese, Mechanismen metabolischer Erkrankungen sowie veränderte Immun- oder vaskuläre Phänotypen, was es zu einem zentralen Knotenpunkt für die Analyse dieser Signalwege macht.
Arnt 1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ARNT-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ARNT abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ARNT-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ARNT-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.