Plasmide CRISPR d'Activation (h) Arnt 1: sc-401039-ACT

L’ARNT humain (aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator ; HIF‑1β) code un facteur de transcription bHLH‑PAS qui forme des hétérodimères avec des partenaires tels que l’AHR et HIF‑1α/HIF‑2α afin d’orchestrer des programmes d’expression génique dépendants des stimuli. Les complexes contenant ARNT régulent la signalisation de réponse aux xénobiotiques, l’adaptation cellulaire à l’hypoxie, des réseaux transcriptionnels angiogéniques et métaboliques, ainsi que des voies plus larges de réponse au stress influençant la prolifération et la différenciation. De ce fait, ARNT est fréquemment étudié dans des contextes reliant les expositions environnementales à une reprogrammation transcriptionnelle, ainsi que dans des modèles pertinents pour la maladie où la signalisation de l’hypoxie et l’activité de la voie AHR contribuent à des modifications de l’état cellulaire et de l’expression génique. Sa position centrale au sein des circuits transcriptionnels de la famille PAS fait d’ARNT un nœud utile pour disséquer les interactions entre voies et les mécanismes de contrôle transcriptionnel.

Arnt 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ARNT sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Arnt 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ARNT dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ARNT, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Arnt 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ARNT natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Arnt 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Arnt 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ARNT silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.