Plasmide CRISPR d'Activation (h) ARMCX1: sc-407214-ACT

ARMCX1 (armadillo repeat-containing, X-linked 1) code une protéine à répétitions armadillo associée aux mitochondries, impliquée dans la régulation du transport mitochondrial, de la dynamique des mitochondries et du contrôle qualité, de manière dépendante du type cellulaire. Par ses interactions avec le cytosquelette et les systèmes de positionnement des organites, ARMCX1 a été associé à des processus tels que l’extension des neurites, les réponses au stress cellulaire et le maintien de l’homéostasie mitochondriale. Une activité altérée de la famille ARMCX a été liée à une dérégulation de l’apoptose, à un remodelage métabolique et à des modifications de la motilité cellulaire, ce qui rend ARMCX1 pertinent pour l’étude de la neurobiologie et de phénotypes liés au cancer. En tant que gène lié au chromosome X, ARMCX1 offre également un cadre utile pour étudier la régulation biaisée selon le sexe et les effets de dosage dans des modèles cellulaires humains.

ARMCX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ARMCX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ARMCX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ARMCX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ARMCX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ARMCX1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ARMCX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ARMCX1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ARMCX1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ARMCX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.