Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
ARL4D Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406905
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ARL4D El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ARL4D, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ARL4D Anticuerpo (F-2): sc-271273
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ARL4D Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406905 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
ARL4D (factor de ADP‑ribosilación tipo ARF, GTPasa 4D) es una pequeña proteína de unión a GTP similar a ARF que alterna entre los estados unidos a GDP y a GTP para coordinar el tráfico de membranas y la remodelación del citoesqueleto. Se ha implicado en la regulación de la dinámica de la actina, el transporte vesicular y la señalización compartimentalizada en las membranas celulares, procesos que influyen en la forma celular, la polaridad y la motilidad. La actividad de ARL4D se interconecta con vías controladas por pequeñas GTPasas que gobiernan el reclutamiento de efectores a la membrana y la organización de las rutas de tráfico. La alteración de la expresión o de la señalización de ARL4D se ha estudiado en el contexto de fenotipos de proliferación y migración desregulados relevantes para la oncología y otros trastornos relacionados con la dinámica de membranas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ARL4D (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ARL4D en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ARL4D junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ARL4D tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ARL4D.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ARL4D para la investigación de la señalización de ARL4D, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de ARL4D críticos para la función de ARL4D
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ARL4D para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ARL4D CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ARL4D CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ARL4D. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ARL4D (h) y el plásmido HDR ARL4D (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ARL4D para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ARL4D definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.