Plasmide CRISPR/Cas9 KO ARL4D (h): sc-406905

Présentation

ARL4D (ADP ribosylation factor–like GTPase 4D) est une petite protéine liant le GTP de type ARF, qui alterne entre des états liés au GDP et au GTP afin de coordonner le trafic membranaire et le remodelage du cytosquelette. Elle a été impliquée dans la régulation de la dynamique de l’actine, du transport vésiculaire et d’une signalisation compartimentée au niveau des membranes cellulaires, des processus qui influencent la forme cellulaire, la polarité et la motilité. L’activité d’ARL4D recoupe des voies contrôlées par de petites GTPases, qui gouvernent le recrutement membranaire d’effecteurs et l’organisation des itinéraires de trafic. Des altérations de l’expression ou de la signalisation d’ARL4D ont été étudiées dans le contexte de phénotypes de prolifération et de migration dérégulées, pertinents en oncologie et dans d’autres troubles impliquant la dynamique membranaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ARL4D (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ARL4D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ARL4D, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ARL4D à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ARL4D.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ARL4D pour l'étude de la signalisation de ARL4D, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ARL4D essentiels à la fonction de ARL4D
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ARL4D pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ARL4D plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ARL4D plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ARL4D. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ARL4D plasmide HDR (h) et le ARL4D (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ARL4D pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ARL4D définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.