Plasmide CRISPR/Cas9 KO ARL15 (h): sc-412313

Présentation

ARL15 (ADP-ribosylation factor-like GTPase 15) est une petite GTPase de la famille ARF impliquée dans la régulation du trafic membranaire intracellulaire et de la signalisation associée aux organites, des processus qui influencent le recyclage des récepteurs, la dynamique endosomale et la gestion des lipides spécifique à chaque compartiment. Par ces rôles, ARL15 est susceptible d’affecter le métabolisme cellulaire et les voies de transduction du signal qui dépendent du transport vésiculaire et de la composition de la membrane plasmique. Des études génétiques humaines ont associé des loci d’ARL15 à des traits cardiométaboliques, notamment des phénotypes liés à l’adiposité et à l’insuline, ce qui justifie l’exploration d’ARL15 dans l’homéostasie métabolique et la biologie des maladies associées. Son expression et son activité peuvent donc être exploitées pour étudier comment la signalisation des GTPases liée au trafic s’articule avec les réponses endocrines et les programmes cellulaires dépendants des nutriments.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ARL15 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ARL15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ARL15, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ARL15 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ARL15.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ARL15 pour l'étude de la signalisation de ARL15, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ARL15 essentiels à la fonction de ARL15
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ARL15 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ARL15 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ARL15 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ARL15. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ARL15 plasmide HDR (h) et le ARL15 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ARL15 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ARL15 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.