Plasmide Double Nickase (h) ARL13B: sc-417325-NIC

ARL13B code une petite GTPase de type Arf enrichie dans les cils, qui favorise l'assemblage et la stabilité du cil primaire ainsi que l'identité de la membrane ciliaire, coordonnant ainsi le trafic des composants de signalisation au sein du compartiment ciliaire. ARL13B contribue à l'organisation de l'architecture axonémale et régule des voies dépendantes des cils, notamment la signalisation Sonic hedgehog, avec des effets en aval sur la mise en place des patrons de développement et les programmes de différenciation cellulaire. La perturbation d'ARL13B altère la ciliogenèse et la transduction du signal, reliant le dysfonctionnement d'ARL13B à des phénotypes évocateurs de ciliopathies et à des troubles du neurodéveloppement tels que le syndrome de Joubert. En tant que GTPase ciliaire, ARL13B est largement utilisée comme marqueur et nœud mécanistique pour étudier la biogenèse des organites, le trafic membranaire et la compartimentation des voies de signalisation dans les cellules humaines.

ARL13B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARL13B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARL13B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARL13B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARL13B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.