ARL13B Double Nickase Plasmid (h): sc-417325-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ARL13B Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ARL13B Double-Nickase-Plasmid (h) und ARL13B Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ARL13B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ARL13B: sc-515784
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ARL13B Double Nickase Plasmid (h) | sc-417325-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ARL13B Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417325-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARL13B kodiert eine in Zilien angereicherte kleine Arf-ähnliche GTPase, die den Aufbau und die Stabilität des primären Ziliums sowie die Identität der Zilienmembran unterstützt und dadurch den Transport von Signalkomponenten innerhalb des ziliären Kompartiments koordiniert. ARL13B trägt zur Organisation der axonemalen Architektur bei und reguliert zilienabhängige Signalwege, einschließlich des Sonic-Hedgehog-Signalwegs, mit nachgelagerten Effekten auf die Entwicklungsmusterbildung und Programme der zellulären Differenzierung. Eine Störung von ARL13B beeinträchtigt die Ziliogenese und die Signaltransduktion und verknüpft eine ARL13B-Fehlfunktion mit ciliopathie-relevanten Phänotypen und neuroentwicklungsbedingten Erkrankungen wie dem Joubert-Syndrom. Als ziliäre GTPase wird ARL13B häufig als Marker und mechanistischer Knotenpunkt eingesetzt, um Organellenbiogenese, Membrantransport und die Kompartimentierung von Signalwegen in humanen Zellen zu untersuchen.
ARL13B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ARL13B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ARL13B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ARL13B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ARL13B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.