Plasmide Double Nickase (h) Arkadia: sc-403319-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Arkadia correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Arkadia Double Nickase (h) et le plasmide Arkadia Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RNF111. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Arkadia Antibody (1-KK14): sc-134270
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Arkadia | sc-403319-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Arkadia | sc-403319-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF111 code Arkadia, une ligase E3 à domaine RING qui régule la protéostase et la transcription dépendante des signaux en ciblant des substrats spécifiques pour une dégradation médiée par l’ubiquitine. Arkadia est un modulateur clé de la signalisation TGF-β/SMAD : elle renforce l’activité de la voie en ubiquitinant des régulateurs négatifs et influence des processus tels que la transition épithélio-mésenchymateuse, la détermination du destin cellulaire et l’homéostasie tissulaire. Par son contrôle des programmes transcriptionnels et de la stabilité des protéines, RNF111 a été étudié dans divers contextes, notamment la biologie tumorale, la régulation du développement et les voies de signalisation liées à l’immunité. Une dérégulation de l’ubiquitination dépendante d’Arkadia peut modifier l’activité des SMAD et l’expression génique en aval, faisant de RNF111 un nœud pertinent pour étudier le remodelage des voies de signalisation dans des modèles cellulaires liés à des maladies.
Arkadia Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RNF111 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RNF111. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RNF111. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RNF111.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.