Plasmide CRISPR/Cas9 KO ARID1B (m): sc-433726

Présentation

Arid1b code pour ARID1B, une sous-unité contenant un domaine d’interaction riche en AT du complexe de remodelage de la chromatine SWI/SNF (BAF) dépendant de l’ATP, qui régule le positionnement des nucléosomes et l’accessibilité des enhancers. En contrôlant l’état de la chromatine, ARID1B influence des programmes transcriptionnels gouvernant la spécification du destin cellulaire, la prolifération et la différenciation, avec des rôles marqués dans le développement neural et l’expression génique restreinte à certaines lignées. ARID1B participe à une régulation épigénétique en interface avec des voies telles que Wnt/β-caténine, Notch et le contrôle du cycle cellulaire, façonnant des sorties transcriptionnelles dépendantes du contexte. L’altération de la fonction d’ARID1B a été associée à des troubles du développement et à des phénotypes neurodéveloppementaux, et les modifications de la composition de SWI/SNF sont fréquemment étudiées dans des modèles pertinents de dérégulation transcriptionnelle liés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ARID1B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Arid1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Arid1b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Arid1b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ARID1B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Arid1b pour l'étude de la signalisation de ARID1B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Arid1b essentiels à la fonction de ARID1B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Arid1b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ARID1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ARID1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Arid1b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ARID1B plasmide HDR (m) et le ARID1B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Arid1b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Arid1b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.