ARHGAP18 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413983-ACT

ARHGAP18 codifica uma proteína ativadora de GTPase (GAP) de Rho que reduz a sinalização da família Rho ao acelerar a hidrólise de GTP, ajudando a ajustar o equilíbrio entre as formas ativas e inativas das GTPases Rho. Por meio da modulação da remodelação do citoesqueleto, da forma celular, da adesão e da migração, a ARHGAP18 contribui para processos como a regulação da barreira endotelial e a motilidade celular coordenada. Essas funções conectam a ARHGAP18 a vias que governam a dinâmica da actina e a organização das junções, tornando-a relevante para o estudo da biologia vascular e de alterações no comportamento celular em resposta ao estresse. A desregulação da sinalização de GTPases Rho e alterações na atividade ou expressão de ARHGAP18 têm sido associadas, em sistemas experimentais, a fenótipos relacionados à inflamação, migração aberrante e invasão celular associada ao câncer.

ARHGAP18 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARHGAP18 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ARHGAP18 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARHGAP18 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARHGAP18, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ARHGAP18. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARHGAP18 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ARHGAP18 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ARHGAP18 em células tumorais com expressão de ARHGAP18 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.