Plásmido CRISPR de Activación (h) ARHGAP17: sc-403218-ACT

El ARHGAP17 humano codifica una proteína activadora de la actividad GTPasa de Rho que reduce preferentemente la señalización de CDC42 y de proteínas relacionadas de la familia Rho para coordinar la remodelación del citoesqueleto de actina, la polaridad celular y el tráfico de membrana. Al integrar señales que determinan la organización de las uniones celulares y la motilidad, ARHGAP17 influye en procesos como la regulación de la barrera epitelial, la migración direccional y la dinámica endocítica. La desregulación de la señalización de GTPasas Rho en la que participa ARHGAP17 se ha vinculado con alteraciones de la adhesión y fenotipos invasivos en biología del cáncer, así como con contextos de señalización inflamatoria donde el control del citoesqueleto impacta el comportamiento de las células inmunitarias. Como nodo en las redes de GTPasas Rho, ARHGAP17 se estudia con frecuencia para conectar receptores aguas arriba con vías aguas abajo que controlan la morfología, el movimiento y la organización tisular.

ARHGAP17 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ARHGAP17 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ARHGAP17 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ARHGAP17 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ARHGAP17, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ARHGAP17. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ARHGAP17 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ARHGAP17 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ARHGAP17 en células tumorales con expresión de ARHGAP17 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.