Plasmide Double Nickase (h) ARH3: sc-407965-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ARH3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ARH3 Double Nickase (h) et le plasmide ARH3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ADPRHL2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ARH3 Antibody (A-7): sc-374162
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ARH3 | sc-407965-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ARH3 | sc-407965-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **ADPRHL2** code **ARH3**, une ADP‑ribosylhydrolase qui enlève des mono‑ et poly(ADP‑riboses) liées à la sérine des protéines afin d’inverser l’ADP‑ribosylation dépendante des PARP. Par cette activité, ARH3 contribue à réguler la signalisation et la réparation des dommages à l’ADN, la dynamique de la chromatine et les voies de réponse au stress qui reposent sur des modifications réversibles par l’ADP‑ribose. ARH3 agit en coordination avec PARP1/2 et des enzymes apparentées de l’ADP‑ribosylation pour maintenir l’homéostasie du protéome après un stress génotoxique et oxydatif. Des altérations de la fonction d’ADPRHL2 ont été associées à la neurodégénérescence et à une vulnérabilité cellulaire induite par le stress, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la stabilité du génome et des mécanismes de résilience neuronale.
ARH3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADPRHL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADPRHL2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADPRHL2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADPRHL2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.