Plasmide Double Nickase (m) ARH1: sc-419017-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) ARH1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ARH1 Double Nickase (m) et le plasmide ARH1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Adprh. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) ARH1 | sc-419017-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Adprh* code ARH1, une hydrolase des accepteurs d’ADP‑ribose qui inverse la mono‑ADP‑ribosylation sur des résidus d’arginine, régulant ainsi le renouvellement des marques d’ADP‑ribose sur les protéines. En contrôlant cette modification post‑traductionnelle, ARH1 contribue à la signalisation dépendante du NAD⁺ et à une dynamique plus large de l’ADP‑ribosylation, à l’interface des réponses au stress cellulaire, du métabolisme et de la fonction protéique. Des perturbations de l’ADP‑ribosylation liée à l’arginine ont été associées à une dérégulation des réseaux de signalisation et à une altération de l’homéostasie cellulaire, faisant d’*Adprh* un locus utile pour des études mécanistiques de la biologie de l’ADP‑ribose. Dans des modèles murins, la manipulation de l’activité d’ARH1 permet d’examiner comment l’ADP‑ribosylation réversible façonne la physiologie des tissus et des phénotypes pertinents pour les maladies, sans présumer d’effets thérapeutiques.
ARH1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Adprh dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Adprh. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Adprh. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Adprh.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.