Plasmide CRISPR/Cas9 KO ArgRS (m): sc-430545

Présentation

Le gène murin **Rars** code l’arginyl-ARNt synthétase (ArgRS), une aminoacyl-ARNt synthétase cytosolique essentielle qui fixe l’arginine sur son ARNt cognat afin d’assurer une traduction fidèle et l’homéostasie du protéome. En contrôlant l’approvisionnement en ARNt^Arg chargé, ArgRS influence la fidélité de la traduction, les réponses au stress liées à la disponibilité des acides aminés, ainsi que des effets en aval sur les programmes de croissance et de différenciation cellulaires. Une altération de la fonction des aminoacyl-ARNt synthétases a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuromusculaires, à une dysrégulation immunitaire et à des défauts de prolifération, faisant de **Rars** un nœud pertinent pour étudier comment des perturbations liées à la traduction remodèlent les états cellulaires. Dans des modèles murins, la perturbation de **Rars** offre une voie directe pour interroger la fonction d’un gène essentiel, les réseaux compensatoires de synthétases d’ARNt et la sensibilité dépendante du contexte au stress de protéostase.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ArgRS (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rars dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rars, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rars à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ArgRS.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rars pour l'étude de la signalisation de ArgRS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rars essentiels à la fonction de ArgRS
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rars pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ArgRS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ArgRS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rars. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ArgRS plasmide HDR (m) et le ArgRS (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rars pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rars définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.