Particules Lentivirales d'Activation (h) Arg: sc-417779-LAC

ABL2 code Arg (ABL2), une tyrosine kinase non réceptrice qui intègre les signaux provenant des récepteurs aux facteurs de croissance et de l’adhésion médiée par les intégrines afin de réguler le remodelage du cytosquelette d’actine, la formation de replis membranaires (membrane ruffling) et la migration cellulaire. Arg intervient dans des voies qui couplent la signalisation par phosphorylation à la dynamique du cytosquelette, notamment le renouvellement des adhésions focales et des processus liés aux GTPases de la famille Rho, et peut moduler l’endocytose ainsi que les réponses cellulaires aux signaux mécaniques. Une activité dérégulée des kinases de la famille ABL a été associée à un comportement invasif altéré, à une signalisation de survie aberrante et à un remaniement des réseaux oncogéniques dans de multiples contextes tumoraux. Par conséquent, ABL2/Arg est largement étudié dans des modèles de motilité cellulaire, de signalisation dépendante de l’adhésion et de communications croisées entre voies induites par des kinases, pertinentes pour la biologie du cancer et des processus neurodéveloppementaux.

Les particules d'activation lentivirales Arg (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ABL2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Arg (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ABL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Arg. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ABL2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.