Plasmide Double Nickase (h) Arg: sc-417779-NIC

Le gène humain **ABL2** code la tyrosine kinase non réceptrice **Arg**, une protéine de signalisation cytoplasmique qui intègre des signaux issus des récepteurs aux facteurs de croissance et des complexes d’adhérence afin de réguler le remodelage du cytosquelette d’actine, la formation de protrusions membranaires et la motilité cellulaire. Arg phosphoryle de nombreuses protéines du cytosquelette et des protéines adaptatrices, reliant la signalisation kinase à des processus tels que l’endocytose, le guidage axonal et le renouvellement des adhérences focales. Grâce à ses domaines SH3/SH2 et à son domaine kinase, Arg participe à des voies situées en aval des intégrines et des récepteurs à activité tyrosine kinase, influençant la migration, les comportements liés à l’invasion et les réponses cellulaires au stress. Une activité dérégulée des kinases de la famille ABL et une altération du contrôle du cytosquelette dépendant d’Arg ont été associées, dans la recherche en biologie du cancer, à des programmes de signalisation oncogéniques et à des phénotypes anormaux de mouvement cellulaire.

Arg Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ABL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ABL2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ABL2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ABL2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.