Plásmido CRISPR de Activación (h) Arg: sc-417779-ACT

ABL2 codifica Arg, una tirosina quinasa no receptora de la familia Abl que integra señales procedentes de receptores de factores de crecimiento y de complejos de adhesión para regular la remodelación del citoesqueleto de actina, la migración celular y el crecimiento de neuritas. Arg participa en el control dependiente de la fosforilación de la dinámica de las adhesiones focales y de vías vinculadas a las GTPasas Rho que determinan la morfología y la motilidad celulares. A través de sus funciones en la organización del citoesqueleto y la transducción de señales, la actividad o expresión desregulada de ABL2 se estudia en contextos que incluyen la señalización oncogénica, fenotipos asociados a la invasión y la activación aberrante de redes de quinasas. Por ello, Arg humano constituye un nodo útil para estudios mecanísticos del entrecruzamiento de vías impulsadas por quinasas y de comportamientos celulares dependientes del citoesqueleto.

Arg El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ABL2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Arg El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ABL2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ABL2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Arg. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ABL2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Arg en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Arg en células tumorales con expresión de ABL2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.