ARF6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419191

Übersicht

Arf6 kodiert den ADP-Ribosylierungsfaktor 6 (ARF6), eine kleine GTPase, die den Membrantransport an der Plasmamembran, die Endozytose und den Umbau des Aktinzytoskeletts reguliert. ARF6 wechselt zyklisch zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen, um das Vesikelrecycling, den Integrin-Umsatz und die Bildung von Membranruffles zu koordinieren, und verknüpft so Signaleingänge mit Programmen für Zellform und Motilität. Es steht in Wechselwirkung mit dem Phosphoinositid-Stoffwechsel und den GTPase-Netzwerken der Rho-Familie, um Adhäsionsdynamik und die Organisation des kortikalen Aktins zu steuern. Eine fehlregulierte ARF6-Signalgebung wurde mit veränderten Migrations- und Invasionsphänotypen sowie mit Störungen des Membrantransports in Neuronen und Immunzellen in Verbindung gebracht, was ihre Relevanz für mechanistische Studien krankheitsassoziierten Zellverhaltens unterstreicht.

Das ARF6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Arf6-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Arf6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Arf6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ARF6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Arf6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ARF6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Arf6-Exone abzielen, die für die ARF6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Arf6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ARF6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ARF6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Arf6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ARF6 HDR-Plasmid (m) und ARF6 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Arf6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Arf6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.