Plásmido CRISPR de Activación (h) Aquaporin 9/AQP9: sc-401298-ACT

AQP9 codifica la acuaporina 9, un canal de membrana plasmática del tipo acuagliceroporina que facilita el transporte bidireccional de agua y de pequeños solutos como el glicerol, la urea y otros metabolitos neutros. Al regular el flujo de glicerol y el equilibrio osmótico, AQP9 influye en el metabolismo energético celular, la homeostasis redox y las respuestas a señales inflamatorias, con funciones destacadas descritas en hepatocitos y en células de linaje mieloide. La alteración de la expresión de AQP9 se ha asociado con desregulación metabólica y cambios en la función de las células inmunitarias, vinculando este canal con vías implicadas en la gluconeogénesis, el manejo de lípidos y la activación de leucocitos. Estas propiedades hacen de AQP9 un objetivo útil para estudiar el acoplamiento entre el transporte de membrana y el metabolismo, así como la adaptación al estrés en modelos de células humanas.

Aquaporin 9/AQP9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AQP9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Aquaporin 9/AQP9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AQP9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AQP9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Aquaporin 9/AQP9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AQP9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Aquaporin 9/AQP9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Aquaporin 9/AQP9 en células tumorales con expresión de AQP9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.